肉的宰后嫩化关键归因于肌原植物人造纤维材料框架的受损，肌原植物人造纤维材料框架是由内源性核核血清酶质核核血清酶质溶解酶挥发肌原植物人造纤维材料和体癌神经元膜核骨架核核血清酶质出现的。与二十多年来一种是目光聚焦点的钙核核血清酶质酶不一，胱天核核血清酶质酶（caspases）近来成了感兴致话语题。胱天核核血清酶质酶在体癌神经元膜核凋亡的实行时期起着至关很重要的目的，当中caspase-3在去世核核血清酶质核核血清酶质溶解中的目的是几因素和繁杂的，往往值不值得进第一步深入分析。S-亚硝基化采用缓解钙移除、能源新陈代谢、核核血清酶质质挥发和体癌神经元膜核凋亡来缓解肉嫩，有嫩度和持水工作能力。前期工作深入分析发展S-亚硝基化是可以降低依赖社会关系线粒体的caspase-3级联发应，这几率是腿部肌肉体癌神经元膜核凋亡和牛肉片品控转化的原故。caspase-3的深入分析重大是其与体癌神经元膜核凋亡的社会关系，所以，没有有深入分析初探S-亚硝基化缓解caspase-3的规则。

2024年9月由广州现代农业大学本科张万刚先生团体在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱海洋生物为该研究提供了亚硝基化绘制组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

简体中文标题文字：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2028年影响力指数公式：5.7

刊出精力：2024年9月

朋友企业单位：南京农业大学

分析物料：蛋白

拜谱出示高技术：亚硝基化修饰组学

技巧途径：

一、实验报告单

01.Caspase-3生物

迄今为止尚不清除NO对caspase-3的压定制用可不可以归因于NO介导的S-亚硝基化，不同于氨水浓度系数的GSNO身为外源性NO供货，以诱导性caspase-3的离体S-亚硝基化。结果显示反映出，与不会GSNO的组相对于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3特异性重要减轻（图1），与原本报到不同。GSNO治理减轻caspase-3特异性的内在诱因仍急待说明。

图1 的不同浓硫酸浓度的GSNO操作对caspase-3抗逆性的应响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化系数

找寻Caspase-3的亚硝基化的情况，以相一直GSNO对Caspase-3的反映性。经GSNO处理后，测试到caspase-3血清S-亚硝基化的强度加入（图2）。这个的结果得出结论，外源性GSNO提升可成就诱导性caspase-3的体内S-亚硝基化。引人惊呆的是，在没能GSNO会存在的较组中测试到其中一个变弱的S-亚硝基化带，这得出结论caspase-3或者发现内源性的S-亚硝基化。显然，本找寻中caspase-3的S-亚硝基化的情况较高，而caspase-3的灵活性有效降低，这与此前的找寻一直。虽然，caspase-3的特情人S-亚硝基化表达位点尚不非常清楚，还必须进1步的找寻。

图2 GSNO处置对caspase-3S-亚硝基化质量的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化淡化组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。天蓝色标示的队列透露S-亚硝基化肽，粉红色标示的C透露S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结血清

结血清为另一种关键的神经细胞系骨架血清，在提升肌神经细胞系组成的的组成的完善性和收敛性方位起着关键做用，设计S-亚硝基化caspase-3对结血清光化学降解的刺激性性含有关键有何意义。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的初始值肌棉植物纤维血清）组比起，0 μM GSNO组（肌原棉植物纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完善结血清含水量为显著降，信息提示caspase-3对结血清含有隐藏的血清油脂水解效率。在GSNO孵育后，完善结血清的含水量显著的增多（P < 0.05）。不仅而且，当GSNO浓硫酸浓度提高时，完善结血清的含水量快速调涨（P < 0.05）（图5）。这种得知体现了，SNO体现的caspase-3以平均水平依赖症的的方法调控结血清的光化学降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3分解肌钙核蛋白-T

肌钙球淀粉酶-T (TnT)是原肌球球淀粉酶控制器责任肌群膨胀的丝条的须得肌原仟维板球淀粉酶。TnT的溶解的特征是判断到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化的条件下，caspase-3对TnT的溶解情况发生图甲6下图，与Std组（包含caspase-3和GSNO的肌原仟维板）相信，caspase-3组中30 kDa TnT段落强势增多，显示caspase-3参与进来了TnT的溶解，显然，caspase-3与GSNO的孵育诱发30 kDa TnT减低。在100和200 μM GSNO组相互之间并没有判断到很深的不同之处(P > 0.05)，而当GSNO的浓硫酸浓度可达到400 μM 时，该段落强势减低(P < 0.05)。哪些出现显示了SNO装饰的caspase-3对TnT溶解的调控效果。结球淀粉酶和TnT是caspase-3的灵敏底物，而GSNO解决拉低caspase-3的渗透性可能性诱发肌原仟维板球淀粉酶溶解方面拉低。与此同时上述，NO分析的S-亚硝基化不错根据装饰半胱氨酸残基来控制器caspase-3的渗透性，随之进一大步决定其对结球淀粉酶和TnT的球淀粉酶蛋白质水解效率，以此决定牛羊肉质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙核蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人总结

本探究目的在于探究S-亚硝基化对caspase-3体现的的反应简答接着随后对牛羊肉肌原植物食物纤维休外可降解的的反应。球血清S-亚硝基化不错体现caspase-3的半胱氨酸残基，以此诱发caspase-3生物消减，进这一步治理和改善了其对牛羊肉肌原植物食物纤维球血清的球血清蛋白质水解本事。

三、拜谱总结

的研究分析运用了酶活测得，亚硝基化绘制组学概述，WB等判断科技手段，发掘核蛋白质酶S-亚硝基化就可以绘制caspase-3的半胱氨酸残基，这造成 了caspase-3渗透性的较低，齐头并进这一步能够抑制了其对牛肉片肌原植物纤维核蛋白质酶的核蛋白质酶水解反应工作能力。本的研究分析为诠释核蛋白质酶质亚硝基化对肉质地的调节作用管理机制保证半个个新的第三视角。

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基准论文文献综述：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663